实验十八 | 外源基因在无细胞表达系统麦胚提取物中的表达 (知识分享）

主要观点总结

本文介绍了无细胞表达系统麦胚提取物进行外源基因表达的原理和方法。无细胞表达系统包括原核和真核两大类，麦胚提取物是真核无细胞表达系统之一，被商业化生产用于病毒、酵母、高等植物以及哺乳动物蛋白质的合成。文章详细描述了实验材料、实验设备、实验用具和实验试剂，以及实验步骤和注意事项。

关键观点总结

关键观点1: 无细胞表达系统的原理

无细胞表达系统是模拟生物细胞的生命现象，重现胞内蛋白质的转录和翻译过程，实现外源基因在体外快速大量的表达。

关键观点2: 麦胚提取物表达系统的特点

麦胚提取物表达系统可以表达各种有毒蛋白质和膜蛋白，缩短实验周期，提高工作效率。作为一个开放的系统，可以调控基因的转录、蛋白质的合成和修饰。但表达的效率较低，待表达的mRNA需要有“帽子”结构。

关键观点3: 实验步骤

实验步骤包括利用酶对载体进行酶切，纯化回收酶切后的质粒，配制麦胚提取物中RNA体外转录的反应液和外源基因表达的反应液，通过SDS-PAGE分析表达的外源蛋白质。

关键观点4: 注意事项

使用麦胚提取物表达系统成功表达外源蛋白质的关键是不含RNA等其他杂质的高纯度质粒DNA。此外，该表达系统较适合表达分子量较小的蛋白质。